⑴ 蛋白质样品的准备
①测定蛋白质分子中多肽链的数目  根据蛋白质N—末端或C—末端残基的摩尔数和蛋白质的相对分子质量可以确定蛋白质分子中的多肽链数目。
②拆分蛋白质分子的多肽链  如果蛋白质分子是由一条以上多肽链构成的，则这些链必须加以拆分。可用变性剂如8mol／L尿素，6mol／L,盐酸胍或高浓度盐处理打开共价键，就能使寡聚蛋白质中的亚基拆开；用氧化剂或还原剂将二硫键断裂。
③用相应的方法分离纯化各亚基
⑵ 分析每一多肽链（亚基）的氨基酸组成
①裂解多肽链成较小的片段  用两种或几种不同的断裂方法(指断裂点不一样)将每条多肽链样品降解成两套或几套重叠的肽段或称肽碎片。
②每套肽段进行分离、纯化，鉴定多肽链的N—末端和C—末端残基。以便建立两个重要的氨基酸序列参考点。
③测定各肽段的氨基酸序列  目前最常用的肽段测序方法是Edman降解法，并有自动序列分析仪可供利用。此外尚有酶解法和质谱法等。
⑶ 排列成完整的氨基酸序列结构
①重建完整多肽链的一级结构  利用两套或多套肽段的氨基酸序列彼此间有交错重叠可以拼凑出原来的完整多肽链的氨基酸序列。
②确定半胱氨酸残基间形成的S--S交联桥的位置。 
应该指出，氨基酸序列测定中不包括辅基成分分析，但是它应属于蛋白质化学结构
3．⑴ 各肽链以C原子为转折点，以肽链平面为单位，形成稳固的右手螺旋。
⑵ 每螺旋有3．6个氨基酸残基，螺距约0．54nm，每个氨基酸残基绕螺旋中心轴放置100，上升0．15nm
⑶ 相邻两螺旋之间借螺旋上段肽键的－C=0和下段－NH形成链内氢键而稳定，即主链中螺旋段的第一个肽链平面的－NH与后面第四个肽键平面的－C=0构成氢键。
⑷ 各氨基酸残基的侧链R基因均伸向螺旋外侧。R基团的大小、电荷状态及形状对-螺旋的形成及稳定有影响
4.    氨基酸具有氨基和羧基，均可游离成带正电荷或负电荷的离子，此外有些氨基酸的侧链液能解离成带电荷的基团，当氨基酸解离成阳离子和阴离子的趋势及程度相等时，成为兼性离子，呈电中性，此时溶液的pH值为该氨基酸的等电点。精氨酸由三个可解离的基团，根据精氨酸的电离时产生的兼性离子，其两边的pK值分别为12．48和9．04，所以pI＝（12．48＋9．04）/＝10．76
5．    基缔合形成四级结构的蛋白质分子能够产生极其重要的功能效果，亚基与亚基通过接触或通过解聚或聚合沟通了单个亚基之间的信息联系，一个配基或底物分子与蛋白质分子中某一亚基结构产生的效果会传递，影响其它亚基进一步作用的过程。这种亚基间的相互作用为生化过程中的调节控制提供了一种作用模式，因而具有普遍的重要性，使得具有四级结构的蛋白质分子在表达功能时可被调节，接受信息，这样就在更高的层次上，更完善地表达蛋白质的功能，适应机体的需要。
6．    白质二级结构是指多肽链主链原子的局部空间排布，不包括侧链的构象。它主要有 α－螺旋、 β－折叠、β －转角和无规卷曲四种。在 α－螺旋结构中，多肽链主链围绕中心轴以右手螺旋方式旋转上升，每隔3．6个氨基酸残基上升一圈。氨基酸残基的侧链伸向螺旋外侧。每个氨基酸残基的亚氨基上的氢与第四个氨基酸残基羰基上的氧形成氢键，以维持 α－螺旋稳定。在 β－折叠结构中，多肽链的肽键平面折叠成锯齿状结构，侧链交错位于锯齿状结构的上下方。两条以上肽链或一条肽链内的若干肽段平行排列，通过链间羰基氧和亚氨基氢形成氢键，维持 β－折叠构象稳定。在球状蛋白质分子中，肽链主链常出现1800回折，回折部分称为 β－转角。 β－转角通常有4个氨基酸残基组成，第二个残基常为辅氨酸。无规卷曲是指肽链中没有确定规律的结构。
7．    引起蛋白质变性的因素很多，物理因素如：热、光等，化学因素如酸、碱、有机溶剂、三氯乙酸和去垢剂等，它们的作用机制分别如下：
⑴ 热变性主要是肽段受过分的热振荡而引起氢链破坏，热变性一般是不可逆的，在溶  
液中则出现凝固沉淀现象，冷却后就难以再溶液，凝固沉淀的形式可能为松散伸展肽链的交织。
⑵ 酸碱作用是破坏盐键，因极高的[H+]可使-COO–基变成-COOH基，而极低的[H+]又可使一NH3+基变成-NH2，这样就破坏了盐键，影响到分子的构象，从而导致变性。
⑶ 高浓度亲水的有机溶剂如乙醇、丙酮等的变性作用可能与降低蛋白质的介电常数有关。
⑷ 促溶剂的变性作用是与它的破坏蛋白质结构中非极性侧链之间的疏水相互作用有关，有四级结构的也可解离开来。
⑸ 去垢剂：能破坏蛋白质分子结构中非极性侧链间的疏水相互作用，在很低浓度就能使亚基解聚，并能使亚基变性。
⑹ 三氯乙酸：为酸性物质，能使蛋白质正电荷，与三氯乙酸的负离子结合，使蛋白质变性、沉淀。
8．    蛋白质是亲水胶体，维持蛋白质胶体溶液稳定的重要因素有两个，一个是蛋白质颗粒表面大多为亲水基团，可吸引水分子，形成颗粒表面水化膜，使其溶解在水溶液中；另一个是同种蛋白质胶粒表面带有同种电荷，电荷的相互排斥作用使蛋白胶体颗粒最大限度分散在溶液中。以上两个原因可起到胶粒稳定的作用，使蛋白质颗粒难以相互聚集从溶液中沉淀析出。如去除蛋白质胶粒的上述两个稳定因素时，可使蛋白质易从溶液中析出，在蛋白质分离中的盐析和丙酮沉淀直接依据这一原理。蛋白质分子可呈两性解离，其电离过程和带电状态决定于其等电点和溶液的pH值。蛋白质在等电点的溶液中溶解度最小。盐析：在蛋白质溶液中加入大量中性盐，可破坏蛋白质在水溶液中的稳定性因素(水化膜和电荷)，使蛋白质从溶液中沉淀析出。调溶液的pH值为蛋白质等电点更有利于盐析。






 
    
第二章 核酸的结构与功能　　
本章重点

一、核酸的化学组成
1．核苷酸中的碱基成分  
2．戊糖与核苷 
3．核苷酸的结构与命名

二、核酸的一级结构
1．DNA和RNA的一级结构  
2．RNA与DNA的差别

三、DNA的空间结构与功能
1．DNA的二级结构——双螺旋结构模型 
⑴ ＤＮＡ的双螺旋结构的研究背景 
⑵ ＤＮＡ双螺旋结构模型的要点 
2．ＤＮＡ结构的多样性 
3．DNA的超螺旋结构
4．DNA在真核生物细胞核内的组装 
5．DNA的功能

四、RNA的空间结构与功能
1．信使RNA的结构与功能 
2．转运RNA的结构与功能 
3．核蛋白体RNA的结构与功能 
4．其他小分子ＲＮＡ 
5．核酶

五、核酸的理化性质及其应用
1．核酸的一般理化性质
2．ＤＮＡ的变性
3．ＤＮＡ的复性与分子杂交

练习题
一、    选择题
1．稀有核苷酸主要存在于下列哪一种核酸中
A．rRNA　　B．mRNA　　C．tRNA　　D．核DNA　　E．线粒体DNA
2．在核酸中，核苷酸之间的连接方式为
A．2′、3′-磷酸二酯键 　　　B．3′、5′-磷酸二酯键　　
C．2′、5′-磷酸二酯键　　　 D．糖苷键　　        E．氢键
3．下列几种DNA分子的碱基组成比例各不相同，哪一种DNA的解链温度(Tm)最低?
A．DNA中A+T含量占15%　　B．DNA中G+C含量占25%　　
C．DNA中G+C含量占40%   D．DNA中A+T含量占40%　
E．DNA中G+C含量占70%
4．核小体串珠状结构的珠状核心蛋白质是
A．非组蛋白　　　　　　　　　　　 B．H2A、H2B、H3、H4各一分子　
C．H2A、H2B、H3、H4各二分子　　D．H2A、H2B、H3、H4各四分子　　
E．H1组蛋白与140-150碱基对DNA
5．DNA受热变性时
A．260nm波长处的吸光度下降　　B．多核苷酸链裂解成寡核苷酸链　　
C．碱基对可形成共价连接　　　　　D．加入互补RNA链，再冷却，可形成DNA/RNA杂交分子　　E．溶液粘度增加
6．核酸在260nm处有最大光吸收是因为
A．嘌呤环上的共轭双键　
B．嘌呤和嘧啶环上有共轭双键　
C．核苷酸中的N-糖苷键　　
D．磷酸二酯键　
E．核糖和脱氧核糖的呋喃型环状结构
7．关于tRNA的叙述下列哪一项是正确的
A．是核糖体的组成部分　　B．携带遗传信息　　C．二级结构为三叶草形　　
D．二级结构为倒L型　　　E．分子较大故构成发夹结构
8．下列关于RNA的叙述哪一项是错误的?
A．主要有mRNA、tRNA、rRNA等种类　　
B．原核生物中没有hnRNA和snRNA　
C．tRNA是最小的一种RNA　　　　　　　
D．胞质中只有一种RNA，即mRNA　
E．组成核糖体的主要是rRNA
9．下列哪一种力不参与维持DNA双螺旋的稳定
A．碱基堆积力　　B．互补碱基对之间的氢键　　C．范德华力　　
D．磷酸基团上的负电荷与介质中的阳离子之间形成的离子键　　E．二硫键
10．关于真核细胞mRNA的叙述，下列哪项是错误的
A．在5′-端有帽子结构，在3′-端有聚A尾巴
B．生物体内各种mRNA的长短差别很大　
C．三类RNA中mRNA的合成率和转化率最快　　
D．聚A尾巴是DNA的转录产物　
E．真核细胞的mRNA前身是hnRNA，在细胞核内合成，在核内剪接，加工而成
11．DNA的Tm是指
A．DNA的生物活性丧失一半时的温度  
B．260nm处吸收值为最大光吸收值的一半时的温度  
C．DNA降解一半时的温度 
D．双螺旋结构失去一半时的温度  
E．最大光吸收自260nm转变成280nm时的温度
12．关于rRNA的叙述，下列哪项是错误的？
A．rRNA是细胞内含量最多的RNA 
B．rRNA与核糖体蛋白共同组成核糖体 
C．核糖体易于解聚的大、小两个亚基组成 
D．真核细胞的核糖体包括5S、16S和23S三种rRNA  
E．rRNA分子中有一些能配对的区域形成局部的双链
13．使DNA溶液有最大吸光度的波长是：
A．240nm             B．260nm            C．280nm       
D．360nm             E．420nm
14．DNA分子中不存在的核苷酸是：
A．dAMP        B．dGMP        C．dTMP    D．dUMP       E．dCMP
15．RNA分子中不存在的核苷酸是：
A．AMP            B．GMP            C．TMP          D．UMP        E．CMP
16．DNA分子中碱基组成的特点是：
A．A+C=G+T  B．A+G=C+T   C．A+G=C+U  D．A+G=U+T    E．A+C=T+U
17．在核酸中占9~11％，且可用之计算核酸含量的元素是
A．碳         B．氧         C．氮         D．磷         E．氢
18．RNA和DNA彻底水解后的产物
A．核糖相同，部分碱基不同  
B．碱基相同，核糖不同  
C．部分碱基不同，核糖不同